A germinal center-indipendent pathway generates unswitche memory B cells early in the primary response
Talyor. J. J. et. al. J.E.M. 209, 597-606 (2012)
naive B cell → GC → memory B cell
↓ ↓
short lived PC long lived PC
memory B cell !!!
・memory B cellはGC B cell由来であると考えられてきた。
・unswithched IgM memory B cellの方が多いことが報告されている。
・memory B cellの分化と、GCの分化がほぼ同時に起こることが報告されている。
・全てのmemory B cellがGC由来であることを示すSHMを受けているわけではない。
→GC indipendent pathwayが存在するのではないか？
（この話自体はそこそこ前からある。2,3 年前の学会でもちらほら話が)
そこでGCが形成される前の、初期状態を調べることでGC indipendet pathwayについて調べた。
Ag : PE Adjuvant : CFA s.c. → PE specific B cellを追いかける
PE-reactive B cells : 20000 cells/mouse
APC-reactive B cells : 4000 cells/mouse
・GC形成の前にmemory phenotypeの細胞およびGL7+の細胞がいる
Ly5.1 mouseからPE-reactive B cellをenrich、CFSEラベルしてLy5.2 mouseに移入→PE/CFAで免疫
PE+CFSElowの細胞を見るとd3ですでにCD38+GL7-のmemory phenotypeの細胞がいる(GC形成はd4-5の間に起こる)
(CFSElowなのでCD38+GL7-naive B cellは除けているのもポイント)
dLNの免疫染色でもd4においてGCの形成は見られないがGL7+のPE-reactive B cellがいることが確認できる。
・CD38+GL7+細胞はGC B precoursor cellか？
CD38+GL7+細胞はCCR6+Fas+PNA-Bcl-6-であることから、GC B cellではなくprecoursor cellっぽい。
Bcl-6-/- B cellからはCD38+GL7+ Bは分化するものの、CD38+GL7- GC B cellは分化してこないこともサポート材料。
CD38+GL7+ B cellをPE/CFAを免疫したtransferして検証→CD38+GL7-、CD38-GL7+の両方に分化する。
→CD38+GL7+はmemory & GC B cellのprecousor cell！
(最初の解析がPE/CFA d6になっているため、recipient側ではGC形成が起こっている。なので、GCを経由していないかは厳密な意味では証明できていない。recipient側がPE/CFA d1 or 2の時点でtransferすれば良かったのでは？)
(CFAのみで免疫したmouseにtransferした場合は、momery側に分化しやすい→cognate helper T cellの存在がfate deicisionに影響を与えている？活性化したB cellのdefault pathwayはmemory, PCで、helperの刺激を受けるとGC B分化?)
・GC independent pathwayのmemoryはどれくらいいるか？
WTとBcl-6-/-のキメラを免疫してtrack。
Bcl-6-/-はGC形成が出来ないので、出てくるmemory B cellは全てGC independent。
IgM+ memory B cellに関してはWTとBcl-6-/-で差が無い→IgM+ memory はGC indipendentに分化する(おそらくCD38+GL7+から)。
IgG+ memory B cellの場合、d6の場合差が無いが後期になるにつれてBcl-6-/-の方がWTに対して少なくなる→初期のIgG+ memory はGC indipendentだが、GC経由のmemoryに徐々に置き換わっていく。
GC B由来のmemoryが減っているのを別の方法で確認。
CD73(ecto-5'-nucleotidase)の発現の有無指標。GC経由だとCD73+。
WTとBcl-6-/-キメラを比較すると、CD73+のmemoryがBcl-6-/- Bで減っていることが確認できる。
anti-CD40L blocking AbでGC形成を阻害するとCD73+ memoryの形成が阻害される(CD73+がGC由来であることの確認)。
→CD73はGC由来のmemoryかどうかを判別するのに有用なmarkerになりうる。
CD73をmarkerとして使用した場合WTでも初期にCD73- memoryが形成され、GCピーク時以降にCD73+なmemoryが形成されるのが確認できる。
初期のmemory→GC indipendentなのがメイン 後期のmemory→swIg+はGC dependentなのがメイン。IgM+ memoryはGC inpdipendentなのがメイン。
・BCR+CD40 signalでGC indipendentなmemoryに分化できる
まとめ
・TD抗原免疫後に出てくる初期のmemory B cellの多くはGC indipendent pathwayによる。
・CD73はmemoryがGC由来かどうかを判別するmarkerとして有用。
・T cellのCD40LによるhelpがGC indipendet memory B cellの形成に重要。
